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  • 張彥欣(項(xiàng)目開發(fā)20萬元起步)

告別針頭時(shí)代:菌落采樣技術(shù)的六次進(jìn)化

菌落采樣是生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)中最基礎(chǔ)也最高頻的操作之一。七十年來,這項(xiàng)技術(shù)經(jīng)歷了六次重大進(jìn)化:從1950年代的手工牙簽和接種環(huán),到1990年代人類基因組計(jì)劃催生的自動(dòng)化金屬Pin,再到一次性針頭、連續(xù)聚合物絲切割、激光微流控,直至2023年出現(xiàn)的采樣球投入式轉(zhuǎn)移技術(shù)。六代技術(shù)的演化遵循同一主線——不斷縮短"采樣工具后處理"的時(shí)間。第六代采樣球方案通過將采樣介質(zhì)與菌落一起投入培養(yǎng)液,從根本上消除了這一環(huán)節(jié),實(shí)現(xiàn)了綜合工況速度的數(shù)量級(jí)突破。

在生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)中,有一個(gè)看似簡單卻至關(guān)重要的操作:從培養(yǎng)皿的瓊脂表面上,把一個(gè)肉眼勉強(qiáng)可見的細(xì)菌菌落,精準(zhǔn)地轉(zhuǎn)移到另一個(gè)容器的培養(yǎng)液中。

這個(gè)動(dòng)作,微生物學(xué)家們每天重復(fù)成百上千次。七十多年來,它所使用的工具和方法經(jīng)歷了六次重大進(jìn)化——每一次進(jìn)化都在解決同一個(gè)核心問題:如何更快、更準(zhǔn)、更干凈地完成菌落的采樣與轉(zhuǎn)移。

我們?cè)噲D用一篇文章,把這六代技術(shù)的來龍去脈梳理清楚。不做評(píng)判,只做記錄。讓我們從一根牙簽開始。

I
第一代
手工挑菌時(shí)代:牙簽、接種環(huán)和人的雙手
1950s 至今(仍在廣泛使用)

最原始也最經(jīng)典的方式。實(shí)驗(yàn)員坐在超凈臺(tái)前,一手持滅菌牙簽或鉑金接種環(huán),另一手固定培養(yǎng)皿,在酒精燈旁邊小心翼翼地挑取單個(gè)菌落,轉(zhuǎn)移到試管或孔板中。

鉑金接種環(huán)可以通過酒精燈火焰灼燒滅菌后重復(fù)使用;一次性塑料接種環(huán)和滅菌牙簽則用完即棄。有些實(shí)驗(yàn)室甚至?xí)缇篮炛苯觼G入液體培養(yǎng)管中,讓牙簽和菌落一起留在培養(yǎng)液里——這是"采樣工具隨樣轉(zhuǎn)移"概念的最原始雛形。

速度:~300個(gè)/小時(shí)(熟練操作員)高度依賴人工,疲勞誤差大
代表工具:鉑金接種環(huán)、一次性塑料接種環(huán)、滅菌牙簽、滅菌竹簽
II
第二代
可重復(fù)使用金屬針頭時(shí)代:機(jī)器人挑菌的開端
1990s — 至今

隨著人類基因組計(jì)劃(HGP)的推進(jìn),菌落挑選的通量需求爆發(fā)式增長。手工操作已經(jīng)無法滿足每天數(shù)萬個(gè)菌落的挑選需求,自動(dòng)化菌落挑選器應(yīng)運(yùn)而生。

這一代的核心思路是:用機(jī)器人代替人手,用金屬針頭代替牙簽。設(shè)備通過CCD相機(jī)拍攝培養(yǎng)皿圖像,軟件自動(dòng)識(shí)別菌落位置,然后由機(jī)械臂驅(qū)動(dòng)金屬針頭(通常為鎢合金材質(zhì),96根并行)精準(zhǔn)蘸取菌落,轉(zhuǎn)移到96孔目標(biāo)板中。

為解決交叉污染問題,金屬針頭在每次挑菌后需經(jīng)過完整的清洗消毒流程:多次乙醇浸泡→鹵素?zé)舾邷睾娓伞鋮s等待。這套消毒流程保證了針頭重復(fù)使用的安全性,但也成為了速度瓶頸——每個(gè)周期中約62%的時(shí)間花在清洗消毒上。

標(biāo)稱速度:~3,000個(gè)/小時(shí)清洗消毒:6次乙醇清洗+鹵素?zé)?/span>綜合工況速度大幅低于標(biāo)稱值
代表產(chǎn)品:美國Molecular Devices QPix系列(1990s至今,全球裝機(jī)超600臺(tái))
III
第三代
一次性針頭/吸頭時(shí)代:用丟棄換取無菌
2000s — 至今

第二代的清洗消毒流程雖然有效,但始終存在隱患:清洗不徹底就會(huì)交叉污染。于是行業(yè)的另一個(gè)流派誕生了——干脆不洗,用完就丟。

這一代設(shè)備用一次性針頭或塑料吸頭代替可重復(fù)的金屬Pin。每挑一個(gè)菌落就換一根新針頭,從根源上杜絕交叉污染。SCARA機(jī)器人配合自動(dòng)退針機(jī)構(gòu),可以在完成一次挑菌后自動(dòng)退掉舊針頭、安裝新針頭。

代價(jià)是耗材成本大幅上升,且退針換針的機(jī)械動(dòng)作同樣需要時(shí)間。有的設(shè)備采用移液槍頭直接吸取菌懸液,但通量較低。

零交叉污染(一次性使用)耗材成本高退針/換針耗時(shí)
代表產(chǎn)品/方案:中國專利CN213529686U(一次性針頭+SCARA機(jī)器人)、美國Hudson RapidPick Harvester(移液槍頭式)、德國Sartorius PrecisionTips
IV
第四代
連續(xù)聚合物絲切割時(shí)代:永遠(yuǎn)用新刀尖
2010s — 至今

英國Singer Instruments提出了一個(gè)巧妙的折中方案:既不反復(fù)清洗同一根針,也不逐個(gè)更換獨(dú)立的一次性針頭,而是用一卷連續(xù)的聚合物絲,每次切出一個(gè)新的端面

這種被稱為PickupLine?的耗材,是一根直徑1mm的特制聚合物擠出絲,以200米長卷的形式裝入設(shè)備。每次挑菌前,設(shè)備內(nèi)部的精密刀片將聚合物絲切出一個(gè)全新的潔凈切面,用這個(gè)切面去蘸取菌落并轉(zhuǎn)移。一卷200米的聚合物絲可以產(chǎn)生超過33,000個(gè)一次性采樣端面。

這個(gè)設(shè)計(jì)巧妙地平衡了成本和無菌性——耗材成本遠(yuǎn)低于獨(dú)立的一次性針頭,同時(shí)每次都用全新切面,不需要清洗。但本質(zhì)上仍然是"點(diǎn)接觸+接觸轉(zhuǎn)移"的模式。

速度:~3,000個(gè)/小時(shí)一次性新切面,無需清洗耗材成本低(一卷做33,000次)仍為點(diǎn)接觸,仍需"脫離"步驟
代表產(chǎn)品:英國Singer Instruments PIXL / PIXL Max(全球超1,000臺(tái)裝機(jī),覆蓋60個(gè)國家)
V
第五代
非接觸式激光微流控時(shí)代:不碰,也能挑菌
2020s — 前沿探索

如果說前四代技術(shù)都在解決"用什么工具接觸菌落"的問題,那么第五代技術(shù)則完全跳出了這個(gè)框架——它根本不接觸菌落。

中國科學(xué)院青島生物能源與過程技術(shù)研究所開發(fā)的Digital Colony Picker,采用微流控芯片替代傳統(tǒng)培養(yǎng)皿,將單個(gè)微生物細(xì)胞隔離在16,000個(gè)皮升級(jí)微腔室中。通過AI圖像識(shí)別鎖定目標(biāo)后,使用激光誘導(dǎo)氣泡技術(shù)"隔空取物",將目標(biāo)微生物以微液滴形式導(dǎo)出。

這是目前最前沿的技術(shù)路線,具有單細(xì)胞分辨率、零污染等優(yōu)勢。但它需要專用微流控芯片(成本高),不兼容傳統(tǒng)培養(yǎng)皿,且通量相對(duì)有限,目前更適合科研探索而非工業(yè)化生產(chǎn)。

零污染(非接觸式)速度:~1,000個(gè)/小時(shí)不兼容傳統(tǒng)培養(yǎng)皿芯片成本高
代表產(chǎn)品:Digital Colony Picker(中科院青島能源所/青島星賽生物,2025年發(fā)表于Nature Communications)
VI
第六代
采樣球投入時(shí)代:不脫離,不清洗,不等待
2023 — 至今

回顧前五代技術(shù),會(huì)發(fā)現(xiàn)一個(gè)有趣的規(guī)律:它們都在不同程度上受困于同一個(gè)問題——"采樣工具與菌落的分離"

第一代用手拔出牙簽,第二代用消毒洗掉殘留,第三代用退針彈掉舊針,第四代用刀片切掉舊端面,第五代干脆不用物理工具。無論哪種方式,"分離"這個(gè)環(huán)節(jié)都消耗著時(shí)間或成本。

第六代技術(shù)走了一條完全不同的路:不分離。

采樣球投入式轉(zhuǎn)移技術(shù),使用一顆經(jīng)過8道工序滅菌處理的微型球體(直徑約2mm),通過氣動(dòng)吸筆吸取后,球面蘸取培養(yǎng)皿中的菌落,然后將采樣球連同菌落一起直接投入目標(biāo)培養(yǎng)液中。球留在液體里,不需要取出,不需要清洗,不需要任何后處理。釋放一顆球,立即吸取下一顆新球,中間零等待。

這個(gè)思路乍看簡單甚至"粗暴"——但它從根本上消除了困擾前五代技術(shù)的速度瓶頸。當(dāng)62%的周期時(shí)間(清洗消毒)被歸零,速度的數(shù)量級(jí)飛躍就自然發(fā)生了。

配套的飛拍檢測系統(tǒng)可以在每次采樣前對(duì)采樣球進(jìn)行四重質(zhì)量預(yù)檢(吸取確認(rèn)、完整性檢測、潔凈度檢測、影像追溯),雙二維碼信息匹配系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)對(duì)應(yīng)采樣——這些都是前五代技術(shù)不需要、也不存在的全新需求。

采樣球已發(fā)展出多種材質(zhì):玻璃球(磨砂表面,增加菌體附著量)、鋼球(密度高,沉入穩(wěn)定)、可溶性球(溶解后不留殘留),不同客戶根據(jù)生物學(xué)需求選擇。

綜合工況速度:≥3,000個(gè)/小時(shí)(經(jīng)SAT驗(yàn)收)一次性使用,零交叉污染耗材成本極低
代表產(chǎn)品:中國青島工發(fā)智能 二代菌落采樣工作站(已獲多家頭部基因合成企業(yè)采購并通過SAT驗(yàn)收,已申請(qǐng)國內(nèi)發(fā)明專利及PCT國際專利)

六代技術(shù)全景對(duì)比

世代核心方案時(shí)代采樣工具去向速度瓶頸綜合速度
I手工牙簽/接種環(huán)1950s火焰灼燒/丟棄人工操作~300/h
II可重復(fù)金屬Pin1990s清洗消毒后重復(fù)使用清洗消毒(~78秒/周期)標(biāo)稱3,000/h
III一次性針頭/吸頭2000s退針丟棄退針換針未公開
IV聚合物絲切割2010s切掉丟棄送絲切割~3,000/h
V激光微流控2020s無物理介質(zhì)芯片通量~1,000/h
VI采樣球投入式2023留在培養(yǎng)液中無(零后處理)≥3,000/h(綜合)

六代技術(shù)的演進(jìn)邏輯

縱觀六代技術(shù),可以清晰地看到一條演化主線:行業(yè)一直在尋找更好的方式來解決"采樣工具的后處理"問題。

第I代:人工火焰灼燒 → 第II代:機(jī)器自動(dòng)清洗消毒 → 第III代:不洗了,直接換新的 → 第IV代:不換獨(dú)立的針頭,切一段新絲面 → 第V代:不用物理工具了 → 第VI代:用物理工具,但不取回來。

每一代都在試圖縮短"后處理"的時(shí)間。第六代的突破在于——它不是把后處理做得更快,而是讓后處理這個(gè)概念本身消失了。

從牙簽到采樣球:一個(gè)關(guān)于"不起眼的工具"的故事

回望這七十年的技術(shù)演化,最令人感慨的或許是:推動(dòng)變革的從來不是多么復(fù)雜的理論突破,而是對(duì)一個(gè)樸素問題的反復(fù)追問——"能不能再簡單一點(diǎn)?"

第一代技術(shù)的牙簽法中,有些實(shí)驗(yàn)員習(xí)慣把蘸了菌落的牙簽直接丟進(jìn)培養(yǎng)管里——這個(gè)最"偷懶"的操作方式,無意中成為了第六代采樣球技術(shù)的思想原型。只不過,從"手動(dòng)扔牙簽"到"機(jī)器人自動(dòng)投放經(jīng)過8道工序滅菌的采樣球",中間隔了七十年和五代技術(shù)的積累。

"最好的工具,是你忘記它存在的那種。
采樣球進(jìn)入培養(yǎng)液的那一刻,工具就消失了。
消失,就是它最好的狀態(tài)。"

菌落采樣技術(shù)的進(jìn)化還在繼續(xù)。也許未來會(huì)有第七代、第八代。但無論技術(shù)如何演進(jìn),核心目標(biāo)始終沒有改變:更快、更準(zhǔn)、更干凈地把一個(gè)菌落從這里送到那里。

六代技術(shù),七十年求索,為的不過是這一件小事。

參考資料:本文中各代技術(shù)的產(chǎn)品信息和參數(shù)數(shù)據(jù)來源于相關(guān)廠商公開發(fā)布的產(chǎn)品手冊(cè)、學(xué)術(shù)論文及專利文獻(xiàn),包括但不限于:Molecular Devices QPix Colony Picking Series Brochure、Singer Instruments PIXL Specifications、Nature Communications (2025) AI-powered Digital Colony Picker、中國專利CN213529686U、中國專利CN117305088A等。本文旨在客觀梳理行業(yè)技術(shù)演化歷程,不代表對(duì)任何特定產(chǎn)品的評(píng)價(jià)。

關(guān)于青島工發(fā)智能科技有限公司
青島工發(fā)智能科技有限公司專注于生命科學(xué)自動(dòng)化設(shè)備的研發(fā)與制造,是全球首家采用"采樣球投入式轉(zhuǎn)移"技術(shù)路線的菌落采樣設(shè)備制造商。公司擁有多項(xiàng)發(fā)明專利及PCT國際專利申請(qǐng),產(chǎn)品服務(wù)于國內(nèi)外多家知名生命科學(xué)企業(yè)和科研機(jī)構(gòu)。

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